干細(xì)胞的原代提取

神經(jīng)干細(xì)胞
目前，神經(jīng)干細(xì)胞的分離方法主要有三種：無血清培養(yǎng)基自然篩選法、流式細(xì)胞術(shù)分選法、免疫磁珠分選法。
無血清培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用，也是zui簡單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細(xì)胞無法較長時(shí)間地成活，而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并繁殖的神經(jīng)干細(xì)胞群體。

步驟： （1）取胎腦；
（2）用吸管吹吸使細(xì)胞分散均勻；
（3）加小鼠神經(jīng)干*培養(yǎng)基培養(yǎng)。

脂肪間質(zhì)干細(xì)胞
分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞主要是通過膠原酶進(jìn)行消化，獲得細(xì)胞懸液。分離培養(yǎng)大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞的大致步驟如下：
（1）取腹股溝處脂肪，充分剪碎；
（2）加入膠原酶，將其轉(zhuǎn)移至離心管中進(jìn)行消化30分鐘，加入培養(yǎng)基終止消化；
（3）離心，大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，接種至培養(yǎng)瓶中。

骨髓間質(zhì)干細(xì)胞
目前常用的分離MSC的方法有密度梯度離心法和全骨髓貼壁法。全骨髓貼壁法的原理是根據(jù)間質(zhì)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢(shì)特性，定期換液除去不貼壁細(xì)胞，從而達(dá)到純化與擴(kuò)增間質(zhì)干細(xì)胞的目的。
步驟 : （1）取大鼠股骨和脛骨，以*培養(yǎng)基沖洗股骨和脛骨骨髓，轉(zhuǎn)移至離心管中，離心，去上清；
（2）大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸，接種培養(yǎng)；
（3）原代培養(yǎng)36h全液量換液，去除未貼壁的造血細(xì)胞，以后每3天換液一次，直到細(xì)胞80-90融合傳代。